RIPA裂解液(强，无抑制剂)

产品货号：

YT614

中文名称：

RIPA裂解液(强，无抑制剂)

英文名称：

RIPA lysis buffer(strong, without inhibitors)

产品规格：

100ml

发货周期：

1～3天

产品价格：

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本制品可以用于动物、植物的细胞或组织样品，也可以用于真菌或细菌样品。本制品不含蛋白酶、磷酸酯酶等抑制剂。使用本裂解液时，用户可以根据具体用途自行添加特定抑制剂或者不添加抑制剂

RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的PAGE、Western、免疫沉淀(IP)、免疫共沉淀(co-IP)和ELISA等。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。

特别说明

用RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用百奥莱博的BCA蛋白浓度测定试剂盒(货号：YT036、YT037)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

产品组成

组分	规格
RIPA裂解液(强，无抑制剂)	100mL
说明书	1份

保存：-20℃，有效期1年。

主要成分

50mM Tris(pH7.4)，150mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS。

注意事项

频繁使用时，可以短期4℃保存。
裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
需自备PMSF。也可以向我司订购PMSF(货号：YT615)。也可以选购总体效果更佳的百奥莱博的通用型蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(货号：YTB4015)，或者根据具体用途选择通用型蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(质谱兼容，货号：YTB4017)、蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品专用，货号：YTB4018)、蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(植物样品专用，货号：YTB4016)、蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(真菌/酵母样品专用，货号：YTB4019)、蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物(细菌样品专用，货号：YTB4020)。如果无需检测磷酸化蛋白，也可以选不含磷酸酶抑制剂的蛋白酶抑制剂化合物。

对于培养细胞样品：
- 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。
- 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入150～250μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触动物细胞1～2秒后，细胞就会被裂解。植物细胞宜在冰上裂解2～10min。
  对于悬浮细胞：离心收集细胞，轻轻vortex或者弹击管底以把细胞尽量分散开。按照6孔板每孔细胞加入150～250μL裂解液的比例加入裂解液。轻弹管底以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50～100万细胞/管，然后再裂解。
  对于细菌或酵母：对于1mL菌液或酵母液，离心去上清，如果有必要可以使用PBS洗涤一次，充分去除液体后，轻轻vortex或者弹击管底以把细菌或酵母尽量弹散。加入100～200μL裂解液，轻轻vortex或者弹击管底以混匀，冰上裂解2～10min。如果希望获得更好的裂解效果，细菌和酵母可以分别使用溶菌酶和破壁酶(Lyticase)消化，然后再使用本裂解液进行裂解。
  裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞或者1mL的菌液或酵母液中的细菌和酵母量加入150μL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200μL或250μL。每100万动物细胞用100μL本制品裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为2～4mg/mL，不同细胞有所不同。
- 充分裂解后，10000～14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
对于组织样品：
- 把组织剪切成细小的碎片。
- 融解RIPA裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM，或者根据实验需要加入适当的上述蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。
- 按照每20mg组织加入150～250μL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。)
- 用玻璃匀浆器匀浆，或使用手持式组织研磨仪研磨，直至充分裂解。也可以把组织样品冷冻后液氮研磨，研磨充分后加入裂解液进行裂解。
- 充分裂解后，10000～14000g离心3～5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。每20mg冻存的小鼠肝脏组织用200μL本裂解液裂解后获得的上清，其蛋白浓度约为15～25mg/mL，不同状态的不同组织有所不同。
- 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器或研磨设备，缺点是不如匀浆或研磨那样裂解得比较充分。
  注：RIPA裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。在不检测和基因组DNA结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

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